課堂 | 大腦研究：樣本形態(tài)和基因表達(dá)之間的相互關(guān)系

高單個(gè)神經(jīng)元切割

實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的可靠分析

帕金森癥是一種常見的進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，它與黑質(zhì)中釋放多巴胺的神經(jīng)元細(xì)胞死亡有關(guān)。受疾病感染的多巴胺釋放神經(jīng)元與健康神經(jīng)元在基因表達(dá)譜上存在差異，而這種差異有助于確定治療的靶基因。

對(duì)于基因表達(dá)分析來說，研究整體組織是徒勞無意義的，單細(xì)胞分辨率才是關(guān)鍵。如果分析多巴胺釋放神經(jīng)元與所有其他腦細(xì)胞的混合物，會(huì)影響研究結(jié)果。

采用徠卡的激光顯微切割 (LMD) 方法能夠特異地從帕金森癥患者尸檢組織中分離單個(gè)多巴胺能神經(jīng)元，從而進(jìn)行分析，消除因檢測(cè)不均質(zhì)細(xì)胞群體造成的誤判。

研究領(lǐng)域

•    阿爾茨海默癥

•    發(fā)育生物學(xué)

•    衰老

•    腫瘤組織的突變分析

•    其他疾病

參考文獻(xiàn)

•    Casli et al., Neuroscience, 2016

•    Schlaudraff et al., Neurobiology of Aging, 2014, 35 (10)

•    Bandyopadhyay et al., JoVE, 2014, 83

•    Gründemann et al., NAR, 2008, 36 (7)

•    Ramirez et al., Nature Genetics, 2006, 38

單細(xì)胞精度的基因表達(dá)分析工作流程

樣本制備

使用冷凍切片機(jī)切片，隨后將制備好的切片放在特制的 LMD 載玻片上。

固定和染色

將組織固定并染色，用于后續(xù)顯微成像和激光顯微切割。可使用染色儀實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。

可視化和定義 ROI

自動(dòng)生成樣本概覽?？梢宰詣?dòng)或手動(dòng)輕松識(shí)別和標(biāo)注感興趣區(qū)域 (ROI)。

激光顯微切割

可使用Leica LMD系統(tǒng)，自動(dòng)切割ROI區(qū)域，并借助重力將切割下來的組織收集到 PCR管或 8 聯(lián)管等標(biāo)準(zhǔn)且經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)室耗材之中。

基因表達(dá)分析

使用傳統(tǒng)的 qPCR ，或者使用微陣列或下一代測(cè)序 (NGS) 等技術(shù)進(jìn)行基因表達(dá)分析。

您將享受如下優(yōu)勢(shì)：

無接觸式單細(xì)胞切割

徠卡提供的激光顯微切割系統(tǒng)是實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞高精度切割的理想之選。您可以一邊觀察，一邊輕松切割單個(gè)細(xì)胞。無接觸切割有助于防止核糖核酸酶等產(chǎn)生的污染。

使用徠卡顯微系統(tǒng)提供 的LMD 系統(tǒng)，通過重力收集分離純化后的物質(zhì)

激光顯微切割前、后的小鼠大腦冷凍切片。甲苯胺藍(lán)染色。