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講述共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟

更新時(shí)間:2018-10-22      點(diǎn)擊次數(shù):1170
     共聚焦顯微鏡TCS SP8包括LED光源、旋轉(zhuǎn)多針孔盤、帶有壓電驅(qū)動(dòng)器的物鏡和CCD相機(jī)。LED源通過多針孔盤(MPD)和物鏡聚焦到樣品表面上,從而反射光。反射光通過MPD的針孔減小到聚焦的部分,這落在CCD相機(jī)上。來自傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的圖像包含清晰和模糊的細(xì)節(jié)。相反,在共焦圖像中,通過多針孔盤的操作濾除模糊細(xì)節(jié)(未聚焦)。只有來自焦平面的光到達(dá)CCD相機(jī)。因此,共聚焦顯微鏡能夠在納米范圍內(nèi)獲得高分辨率。每個(gè)共焦圖像是通過樣品的形貌的水平切片。在不同的焦點(diǎn)高度捕獲圖像產(chǎn)生這樣的圖像的堆疊,通過共焦顯微鏡通過壓電驅(qū)動(dòng)器通過物鏡的垂直位移來實(shí)現(xiàn)。200到400個(gè)共焦圖像通常在幾秒內(nèi)被捕獲,之后軟件從共焦圖像的堆棧重建的三維高度圖像。
    共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟:
     1.開啟儀器電源及光源:一般先開啟顯微鏡和激光器,再啟動(dòng)計(jì)算機(jī),然后啟動(dòng)操作軟件,設(shè)置熒光樣品的激發(fā)光波長(zhǎng),選擇相應(yīng)的濾光鏡組塊。以便光電倍增管(photo multiplier tube,PMT)檢測(cè)器能得到足夠的信號(hào)結(jié)果。使用汞燈的注意事項(xiàng)同普通熒光顯微鏡。
     2.設(shè)置相應(yīng)的掃描方式:在目視模式下.調(diào)整所用物鏡放大倍數(shù),在熒光顯微鏡下找到需要檢測(cè)的細(xì)胞。切換到掃描模式,調(diào)整雙孔針和激光強(qiáng)度參數(shù),即可得到清晰的共聚焦圖像。
     3.獲取圖像:選擇合適的圖像分辨率,將樣品完整掃描后,保存圖像結(jié)果即可。
     4.關(guān)閉儀器:儀器測(cè)定樣品結(jié)束后,先關(guān)閉激光器部分,計(jì)算機(jī)仍可繼續(xù)進(jìn)行圖像和數(shù)據(jù)處理。若要退出整個(gè)共聚焦顯微鏡TCS SP8系統(tǒng),則應(yīng)該在激光器關(guān)閉后,待其冷卻至少10分鐘后再關(guān)閉計(jì)算機(jī)及總開關(guān)。
    共聚焦顯微鏡TCS SP8是一項(xiàng)高分辨率三維光學(xué)成像技術(shù),主要特點(diǎn)在于其光學(xué)分層能力,即獲得特定深度下焦點(diǎn)內(nèi)的圖像,圖像通過逐點(diǎn)采集,以及之后的計(jì)算機(jī)重構(gòu)而成,因此它可以重建拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)復(fù)雜的物體。
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